導讀: 4月23日中央要求各地要結合疫情防控和檢測需求,加強醫療衛生機構實驗室建設。三級綜合醫院均應當建立符合生物安全二級及以上標準的臨床檢驗實驗室,具備獨立開展新型冠病毒檢測的能力;各級疾控機構和有條件的??漆t院、二級醫院、獨立設置的醫學檢驗實驗室也應當加強實驗室建設,提高檢測能力。對醫療資源相對缺乏、檢測能力相對薄弱、疫情防控壓力較大的地區,特別是陸路邊境口岸,要選擇1家綜合實力強的縣級醫療機構予以重點支持,實現縣域內醫療機構具備核酸檢測能力。
臨床基因擴增實驗又稱 PCR實驗,是專門用來檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內所含的基因進行擴增的方法,測出一些病毒含量不高的感染者體內是否含有特定的病毒。由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測出的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優點,因此被臨床醫生廣為認可,已廣泛應用于醫院的臨床診斷和各防疫檢測部門的禽疫病診斷。但是,這種實驗需要有能保證安全、配置合理的實驗室和非常規范的操作為前提。近年來對臨床基因擴增檢驗實驗室的建設越來越得到重視,因為它對檢測結果的可靠性、準確性和安全性起到至關重要的作用。本文主要從臨床基因擴增檢驗實驗室的平面布局,PCR實驗室基本流程進行了介紹。
PCR實驗室布局圖
PCR實驗室原則上分為四個單獨的工作區域:試劑制備區、樣本制備區、核酸擴增區、產物分析區。為避免交叉污染,進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行,即只能從試劑制備區→樣本制備區→核酸擴增區→產物分析區。各實驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。
PCR實驗室基本流程
1.試劑制備區
功能:主要是作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備,試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區,不得經過其它區域。試劑原材料需貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。
品類 | 選型用途 | 推薦品牌 |
超凈工作臺 | 涉及對細菌的操作均需在超凈工作臺下完成 | 蘇州安泰、博科 |
生物安全轉運箱 | 待檢標本的轉運 | 上海颯凌 |
移液器 | 準確量取特定體積溶液20-100ul | 賽多利斯 |
藥品冷藏箱 | 短期保存 | 海信HC-5L75F 70L容積不占場地 |
試劑低溫冰箱 | 可選2-8℃、-20℃、-86℃ | 海信 HC-5L360/HCD-25L210/HD-86L390、HD-86L830BP |
混勻儀 | 移取樣本前需要混勻 | 米歐 MIX-30S |
迷你離心機 | 含反應混合液的瞬時離心 | MINI-5k/8k/10k+ |
消毒車 | 空間環境消毒 | 申興光電 |
滅菌鍋 | 實驗室物品、試劑、培養基消毒滅菌 | SHANAN |
天平(可選配) | 試劑配重 | 奧豪斯 |
2.樣本制備區
功能:臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時DNA的合成。
品類 | 選型用途 | 推薦品牌 |
生物安全柜 | 為了防止有害懸浮微粒、氣溶膠的擴散 | 上海力康/蘇州安泰 |
高速離心機 | 濃縮法:高速離心過柱 | 米歐- MC-15 15000r/min |
高速臺式冷凍離心機 | 用于收集微生物菌體、細胞碎片以及其他沉淀物。有些樣品由于在常溫下不太穩定,需要低溫環境。 | Thermo DH18R |
水浴箱 | 樣本56度滅活 | 米歐WT100-2 |
移液器 | 準確量取特定體積溶液 | 賽多利斯 |
紫外燈/消毒車 | 空間環境消毒 | 申興光電 |
混勻儀 | 移取樣本前需要混勻 | 米歐- MIX-3000 |
金屬浴 | 用于DNA雜交過程中控溫 | 杭州米歐DKT200-2 |
八連管離心機 | PCR體系瞬時離心 | 米歐 mini5k/8k/10k+ |
3.核酸擴增區
功能:主要是DNA擴增,已制備的DNA模板和合成的DNA和主反應混合液,制備成反應混合液等,也可以在本區域內進行。在PCR測定中,通常在擴增后須打開反應管。
品類 | 選型用途 | 推薦品牌 |
熒光定量PCR儀 | 核酸定量分析 | 博樂/羅氏 |
核酸提取儀 | 樣品DNA/RNA提取 | 碩世/天能 |
移液器 | 準確量取特定體積溶液 | 賽多利斯 |
紫外燈/消毒車 | 空間環境消毒 | 申興光電 |
4.產物分析區
功能:主要進行的操作為擴增片段的測定,如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區域可不設。
品類 | 選型用途 | 推薦品牌 |
電泳儀 | 水平電泳用于核酸DNA/RNA檢測,垂直電泳用于蛋白檢測,轉印電泳用于將蛋白轉印到膜上做western檢測 | 伯樂、勤翔 |
凝膠成像系統/紫外檢測儀 | 用于核酸瓊脂電泳和蛋白聚丙酰胺的觀察和拍照;紫外分析儀用于染色后核酸瓊脂電泳膠觀察,不能連接電腦, | 勤翔 |
電爐 | 電泳瓊脂凝膠加熱融化 | 一恒 |
PCR實驗室設備解決方案是上海颯凌科技針對需要建立PCR實驗室的醫院提供的整體解決方案,包括PCR實驗室的搭建、設備配備及試劑的選擇、檢測方法的建立等。目前熒光PCR技術從發展趨勢來看,是各級醫院臨床所迫切需求的一項先進診斷技術。開展熒光PCR診斷項目將有利于醫院檢驗水平的進一步提高,為傳染性疾病的診斷、預防、控制提供了一項新的有效準確的檢測和控制手段。
另一方面,對于要升級為*的醫院,衛生部有硬性要求,必須具備規范化的PCR實驗室,從這一方面來說,PCR實驗室的建設對于醫院的建設具有重要的意義。